El presente estudio trata de un diseño de investigación experimental, de un nivel relacional con una planificación de toma de datos prospectiva, transversal y analítica. Se utilizó la cepa bacteriana identificada ATTC^® 25175^ᵀᴹ Streptococcus mutans adquirida en el Centro de Microbiología Aplicada S.A. de C.V., Guadalajara, Jal., México. Se llevó acabo la elaboración del extracto y el enjuague de Salvia officinalis a diferentes concentraciones en el laboratorio de biotecnología y bioenergía de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Autónoma de Coahuila, Torreón, Coah., México, durante el periodo agosto-septiembre de 2020.

Para preparar el extracto, la presente investigación se basó en el estudio hecho por Beheshti-Rouy y col.¹¹ en 2015 “The antibacterial effect of sage extract (Salvia officinalis) mouthwash against Streptococcus mutans in dental plaque: a randomized clinical trial”. Se cortaron en trozos pequeños las hojas de la planta Salvia officinalis, la cual fue adquirida en un centro comercial de Torreón, en el departamento de frutas y verduras; se dejaron macerar 50 g de hojas en 1500 ml de disolvente (50% de agua/50% de etanol [96%]) en un aparato agitador (KJ-201BD Orbital Shaker) a 90 rpm durante 48 h. Posteriormente, la solución obtenida fue filtrada en papel filtro y en membrana de nylon con porosidad de 5 µm y se transfirió a un aparato termoagitador magnético para separar el disolvente del extracto. Se preparó el enjuague bucal de salvia al 5% (5 ml de extracto en 95 ml de agua destilada), al 10% (10 ml de extracto en 90 ml de agua destilada) y al 100% (100 ml de extracto puro), cada uno fue vertido en un contenedor para su almacenamiento.

Para la preparación de la suspensión bacteriana la cepa bacteriana identificada ATTC^® 25175^ᵀᴹ Streptococcus mutans fue resuspendida en 5 ml de medio infusión cerebro corazón (BHI), se incubó a 37 °C y 200 rpm hasta alcanzar una densidad óptica (OD) de 0.5.

Una vez obtenido el enjuague de Salvia officinalis a sus diferentes concentraciones y preparada la suspensión bacteriana, se procedió a la evaluación del potencial antibacteriano del enjuague de Salvia officinalis, el cual se realizó por el método de difusión en pozos; se emplearon placas con 25 ml de medio de cultivo agar BHI a la mitad de la fuerza, donde se agregaron 100 μL de una suspensión de Streptococcus mutans con una OD de 0.5. Posteriormente, se hicieron cinco pozos en el medio de cultivo; tres para las diferentes concentraciones del enjuague de Salvia officinalis, uno para el control positivo (clorhexidina al 0.12%) y uno para el control negativo (agua destilada). En cada pozo se depositaron 70 µL de la solución correspondiente, tras lo cual las placas inoculadas fueron refrigeradas a 4 ºC por tres horas para su difusión e incubadas a 37 ºC por 24 y 48 h. Transcurrido el tiempo de incubación la actividad antibacteriana se detectó por la presencia de una zona clara de inhibición alrededor del pozo y estos halos fueron medidos con un vernier. Se realizaron cuatro repeticiones para obtener menos variaciones.

El seguimiento rutinario del crecimiento bacteriano se efectuó por turbidimetría, en un espectrofotómetro, la referencia utilizada fue en todos los casos el mismo medio de cultivo.

En matraces de 250 ml, que serán llamados reactores, se agregaron 50 ml de medio liquido BHI por cada tratamiento. Seguidamente, fueron incubados con 100 µL de un preinóculo de solución de células de Streptococcus mutans, cada hora se tomaron 750 µL de muestra y se vertieron en celdillas para medir su OD en el espectrofotómetro por un periodo de 24 h.

Para el análisis estadístico los resultados de las mediciones hechas en el laboratorio se registraron en una hoja de Excel V. 2016 (Microsoft, Inc, Redmond, Wash), luego se exportó al programa GraphPad Prism^© versión 8 (software GraphPad, La Jolla, California, EE.UU.). Para la prueba de hipótesis se aplicó la prueba de ANOVA, luego se hicieron las comparaciones múltiples para determinar si existen diferencias entre pares de tratamientos. Además, se calculó la estadística descriptiva: media y desviación estándar.